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人支氣管成纖維細胞該如何培養(yǎng)?

更新時間:2022-12-06瀏覽:1104次

  成纖維細胞(fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,細胞呈梭形或扁的星狀,具有突起。根據(jù)不同的功能活動狀態(tài),將細胞分為成纖維細胞和纖維細胞二型:成纖維細胞乃是功能活動旺盛的細胞,細胞和細胞核較大,輪廓清楚,核仁大而明顯,細胞質弱嗜堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動;纖維細胞(fibrocy te)功能活動不活躍,細胞輪廓不明顯,核小著色深,核仁不明顯,細胞質少。此二型細胞可互相轉化。
 
  人支氣管成纖維細胞培養(yǎng):
 
  可用酶消化法或組織塊法,其中組織塊法又因其操作簡便、條件易于控制而應用更為普遍。通常,以酶消化法獲得的成纖維細胞懸液在接種后5~10min即可見細胞以偽足初期附著,與 底物形成一些接觸點;然后細胞逐漸呈放射狀伸展,胞體的中心部分亦隨之變扁平;大約在接種后30min,呈現(xiàn)成纖維細胞的形態(tài)。
 
  采用組織塊法則大約在接種后2~3天到1周左右,在接種的皮膚組織塊周圍長出細胞。待細胞融合成片,鋪滿培養(yǎng)容器底壁大部分時即可進行傳代。一般都采用 胰蛋白酶(trypsin),將成纖維細胞從底壁消化下來后分瓶作傳代培養(yǎng)。成纖維細胞在體外培養(yǎng)條件下能保持良好的分裂增殖能力。細胞分裂時變?yōu)榍蛐?;分裂后又平鋪在附著物的表面成為有突起的扁平細胞。體外培養(yǎng)的成纖維細胞,其生命期限與物種等因素有關。
 
  例如:人支氣管成纖維細胞約可培養(yǎng)50代;恒河猴皮膚成纖維細胞能傳代超過40代;雞胚成纖維細胞則只有少數(shù)能培養(yǎng)30代;而小鼠成纖維細胞多數(shù)只能生長8代左右。另外,從老年個體取得的成纖維細胞的壽命要比取自年輕者短。由于在細胞傳代和進行體外培養(yǎng)時,細胞的生物學特性會逐漸發(fā)生一些不同于體內的改變,故通常只將代視這正常細胞,可在此時將生長旺盛的成纖維細胞凍存起來,以備將來復蘇使用,這在將培養(yǎng)的細胞由動物實驗向人體實驗過渡的過程中必須給予足夠的重視。

 

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